幹細胞培養上清液とは | 【公式】スマートクリニック銀座（エクソソーム点滴）

幹細胞培養上清液について

ケガや老化などにより、日々損なわれていく私たちの細胞。
これらの細胞を修復するのが、自ら様々な細胞に分化して再生を促す「幹細胞」です。
「幹細胞培養上清液」とは、幹細胞を培養した時に分泌される上澄み液のこと。
エクソソームやサイトカインなど、数千種類の成長因子（生理活性物質）を含み、幹細胞と同等の効果が期待できるとされています。

エクソソームの働きにより、細胞の活性化や組織の再生促進、血流改善などの効果が期待できます。
エイジングケアの分野でも注目されており、脂肪や骨髄、臍帯など、様々なヒト組織由来幹細胞があるなかで、乳歯の歯髄幹細胞がもっとも多くの成長因子を含むことが分かっています。

歯髄幹細胞培養上清液（エクソソーム）を使う理由

歯髄の育つ環境ゆえの強さ

歯髄は硬い歯に囲まれています。そのため、他の幹細胞培養上清液に比べて、血液供給量が非常に少ない劣悪な環境に置かれています。そのような中で育つので、強く、また傷つきにくい細胞に育ちます。
このような環境下で育った歯髄は、活性能力が非常に高く、細胞分裂や増殖能力が高くなります。増殖能力が高いほど、エクソソームやサイトカインの種類が多くなり、濃度も濃くなります。

当院のU-Factor®液

当院では、国内のGMPに準拠した細胞加工センターと提携し、独自に開発したエクソソーム(幹細胞培養上清液)を「U-Factor®液」と命名し、点滴に使用しています。
当院の「U-Factor®液」は、5,000種類以上のサイトカインを含むたんぱく質と、高濃度のエクソソームの両方を含み、高品質な液剤です

U-Factor®液　4つのポイント

無制限に増殖し、安定的で継続した細胞供給が可能です。

プライマリー細胞に比べて、成長因子やサイトカインの含有量が約30～50倍と報告されています。

多くの細胞タイプに対して効果を発揮することが報告されています。様々な組織や臓器の再生に役立つ可能性を秘めています。

class100(Grade A)、class10,000(Grade B)に維持されたクリーンルームで生産された原料を使用し、第三者機関による厳しい基準の下での品質規格試験を通過しています。

サイトカインとのW配合による高い細胞活性

幹細胞培養上清液の原液には、細胞から放出される乳酸やアンモニアなどの不純物も含まれています。当院の「U-Factor®液」は、それらの不純物を精製によって取り除いています。
幹細胞培養上清液の原液、当院のU-Factor®液、エクソソームのみの抽出液、これら3種類を、濃度を変えて細胞活性試験を行ったところ、U-Factor®液は、エクソソームのみの抽出液よりも高い細胞活性を示しました。

細胞活性試験内容とその結果

実験内容

幹細胞培養上清液の原液
U-Factor®液
エクソソームのみの抽出液

の3種類の濃度を変えて、細胞に添加した時の細胞の活性度合いを調べる実験を行った

実験結果

1の幹細胞培養上清液の原液と、3のエクソソームのみの抽出液は、高濃度になると活性が急激に下がることが、右のグラフ（赤の矢印）で確認できる。
これは不純物の影響が原因と考えられる。また、エクソソームのみの抽出液も、活性度合いが低いことが確認できる。当院の「U-Factor®液」は、高濃度でも細胞活性が上昇し続けることが実験で検証されている。

細胞活性実験結果

実験結果を明示していない幹細胞培養上清液やエクソソームの点滴は、不純物除去と濃縮する精製を行っていない可能性や、細胞活性実験を行っていない可能性があります。

信頼性

起源の明確な歯髄幹細胞を使用

当院の「U-Factor®液」は、日本人児童の脱落する乳歯を採取して、歯髄幹細胞を培養しています。
人を対象とする生命科学・医学系の研究に必要不可欠である倫理委員会の審査を受け、適切なプロセスで抜歯および歯髄組織の採取を行っています。

また、歯髄幹細胞が間葉系幹細胞であることを示す細胞表面マーカーのうち、CD73、CD90、CD105がポジティブ、CD34、CD45がネガティブであることを確認しました。
これは、様々な機能細胞に分化する能力を持った間葉系幹細胞であることが立証されたことを示すものです。

表面マーカー試験データ結果

CD73:Positive

CD90:Positive

CD105:Positive

CD34:Negative

CD45:Negative

当院の「U-Factor®液」は、起源の不明確な歯髄幹細胞や、間葉系幹細胞であることが確認できていない幹細胞は、一切使用していません。

GMP準拠の細胞加工センターで厳格に製造

当院の「U-Factor®液」は、医薬品製造における厳格な品質管理基準とされるGMP（Good Manufacturing Practice）に準拠した細胞加工センターで製造されています。GMPのほか、以下のような省令・ガイドラインに準拠しています。

準拠している省令

GMP医薬品の製造管理及び品質管理基準
GCTP再生医療等製品の製造管理及び品質管理基準
GQP医薬品、医薬部外品、化粧品及び再生医療等製品の品質管理の方法を定めた基準
再生医療等の安全性の確保等に関する法律

準拠している規格・ガイドライン

ISOInternational Organization for Standardization （国際標準化機構）
様々な品質規格を定めている国際機構です。
ICHInternational Council for Harmonization of Technical Requirements for Pharmaceuticals for Human Use(医薬品規制調和国際会議)
世界規模で医薬品に関するガイドラインを促進している国際機構です。
MISEV20182018年に国際細胞小学会(ISEV)によって発表された、細胞外小胞（EV）の研究のためのガイドラインです。

当院の「U-Factor®液」は、製造管理・品質管理・衛生管理などの基準が曖昧な施設で製造された幹細胞培養上清液やエクソソームは、一切使用していません。

細胞の受け入れ時および製品出荷時の検査

細胞加工センターでは、「U-Factor®液」の基となる細胞を受け入れる際、また製品出荷の際に、それぞれ安全性試験を行っています。当院では、それらの試験をクリアしたものだけを「U-Factor®液」として使用しています。

細胞受け入れ時の検査

厚生労働省の生物由来原料基準（平成30年2月28日制定厚生労働省告示第37号）に則り、下記の安全性試験をクリア

無菌試験
エンドトキシン試験／マイコプラズマ試験
ウイルス否定試験（HBs抗原・抗体、HBc抗体、HTLV-I抗体(CLIA)、HIV抗原・抗体、梅毒(PRP/TPHA)）

上清液出荷時の検査

無菌試験
エンドトキシン試験／マイコプラズマ試験
無細胞診検査

4つの安全性試験で徹底した品質管理

当院の「U-Factor®液」は、以下の試験項目ですべて否定されていることを確認しています。

細胞加工医薬品の品質及び安全性に関する指針において推奨されているヒトウイルス（HBV/HCV/HIV/HTLV-I/HIV抗原・抗体/RPR/TPHA）の試験を行っています。試験検体を遠心して回収した細胞から、NucleoSpin RNAを用いてDNA/RNA同時回収手順により核酸抽出を行い、各ウイルスの配列に特異的なプライマー/プローブセットを用いて逆転写/リアルタイムPCR によりウイルスの存在を判定します。

培養時に増殖するカビなどの好気性の細菌、また酸素を必要としない嫌気性の細菌の測定を行っています。無菌試験装置バクテアラートを用いて、試験用培地に試験検体を接種後、32.7℃、7 日間の条件で培養し、菌の増殖性から無菌性を判定します。また、阻害確認試験として、試験用培地に試験検体と各種標準菌を接種し、試験検体と同様の培養を行います。標準菌種も生育が認められ、阻害がないことを判定します。

マイコプラズマは、自己増殖能のある最も小さな微生物であり、生物学的には細菌に分類され、肺炎などを引き起こすことでも知られています。小さすぎることと、細胞壁を持たないので観察が難しい細菌のため、MycoSEQMycoplasma Detection Kit を用いて、検体および検体に陽性コントロールDNAを添加したものからDNA 抽出を行い、マイコプラズマ特異的プライマーを用いてリアルタイムPCR法によりマイコプラズマの存在を判定します。

エンドトキシンは、パイロジェン（発熱性物質）の一種で、発熱作用、致死毒性などの生物活性があります。検体をEndosafe-PTS カートリッジJP に添加し、エンドトキシン測定装置にて測定を行い、カートリッジに組み込まれたエンドトキシン標準品を指標に、エンドトキシン標準品の添加回収率および検体のエンドトキシン濃度の測定を行います。

限りなく純度の高いエクソソーム上清液「U-Factor®液」

当院の「U-Factor®液」は、濃縮の過程でアンモニアや乳酸などの不純物を限りなく除去する精製を行っているため、純度の高いエクソソーム上清液です。

不純物の除去には手間とノウハウが必要です。原液のままや、不純物の濃度が高く品質の良くない状態のものは、体内に点滴すると副作用を起こす可能性があるため、当院では使用いたしません。